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高速冷凍離心機(jī)提取植物蛋白質(zhì)方法

來源：未知發(fā)布日期：2020-06-17 13:51【大中小】

一、植物組織蛋白質(zhì)提取方法

　　1、根據(jù)樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入)，準(zhǔn)備提取液放在冰上。

　　2、把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時(shí))。

　　3、用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃

　　4、提取上清液，樣品制備完成。

　　蛋白質(zhì)提取液：300ml

　　1、1Mtris-HCl(PH8)45ml

　　2、甘油(Glycerol)75ml

　　3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g

　　這種方法針對(duì)SDS-PAGE，垂直板電泳！

二、植物組織蛋白質(zhì)提取方法

　　氯醋酸—丙酮沉淀法

　　1、在液氮中研磨葉片

　　2、加入樣品體積3倍的提取液在-20℃的條件下過夜，然后離心(4℃8000rpm以上1小時(shí))棄上清。

　　3、加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%的β-巰基乙醇)，搖勻后離心(4℃8000rpm以上1小時(shí))，然后真空干燥沉淀，備用。

　　4、上樣前加入裂解液，室溫放置30分鐘，使蛋白充分溶于裂解液中，然后離心(15℃8000rpm以上1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間以沒有沉淀為標(biāo)準(zhǔn))，可臨時(shí)保存在4℃待用。

　　5、用Brandford法定量蛋白，然后可分裝放入-80℃?zhèn)溆谩?/span>

　　藥品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巰基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml滅菌的去離子水中(終體積為5ml)，使用前再加入1M的DTT65ul/ml。

　　這種方法針對(duì)雙向電泳，雜質(zhì)少，離子濃度小的特點(diǎn)！當(dāng)然單向電泳也同樣適用，只是電泳的條帶會(huì)減少！

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